Funkce je dostupná jako součást placených plánů. Koupit předplatné na 1 měsíc za 190 rublů. a využívat službu bez omezení. Přečtěte si více.
Stáhnout dokument
Přidání záložky
Funkce je dostupná jako součást placených plánů. Koupit předplatné na 1 měsíc za 190 rublů. a využívat službu bez omezení. Přečtěte si více.
Sdílet odkaz
Funkce je dostupná jako součást placených plánů. Koupit předplatné na 1 měsíc za 190 rublů. a využívat službu bez omezení. Přečtěte si více.
Přidávání k oblíbeným
Funkce je dostupná jako součást placených plánů. Koupit předplatné na 1 měsíc za 190 rublů. a využívat službu bez omezení. Přečtěte si více.
KRMIVA, KRMIVA, KRMNÉ SUROVINY
Stanovení obsahu mykotoxinů přímou kompetitivní enzymovou imunoanalýzou na pevné fázi
Krmiva, směsná krmiva a suroviny. Stanovení obsahu mykotoxinů přímou kompetitivní imunoenzymatickou metodou na pevné fázi
Datum představení 2019-01-01
Cíle, základní principy a obecná pravidla pro provádění prací na mezistátní normalizaci stanoví GOST 1.0 „Mezistátní normalizační systém. Základní ustanovení“ a GOST 1.2 „Mezistátní normalizační systém. Mezistátní normy, pravidla a doporučení pro mezistátní normalizaci. Pravidla pro vývoj, přijetí, aktualizaci a zrušení”
1 VYVINUTO akciovou společností „All-Russian Scientific Research Institute of Industry krmných směsí“ (JSC „VNIIKP“), společností s ručením omezeným „ZIP-I“ (LLC „ZIP-I“)
2 PŘEDSTAVENO Mezistátním technickým výborem pro standardizaci MTK 4 „Krmné směsi, proteinovo-vitamínové přísady, premixy“
3 PŘIJATO Mezistátní radou pro standardizaci, metrologii a certifikaci (protokol ze dne 1. června 2017 N 51)
Hlasoval pro přijetí:
Krátký název země podle MK (ISO 3166) 004-97
MK (ISO 3166) 004-97
Zkrácený název národního normalizačního orgánu
Ministerstvo hospodářství Arménské republiky
Státní norma Běloruské republiky
Státní norma Republiky Kazachstán
4 Nařízením Federální agentury pro technickou regulaci a metrologii ze dne 15. září 2017 N 1137-st byla od 34108. ledna 2017 uvedena v platnost mezistátní norma GOST 1-2019 jako národní norma Ruské federace.
5 POPRVÉ PŘEDSTAVENO
6 REPUBLIKACE. června 2020
Informace o nabytí účinnosti (ukončení) této normy a jejích změnách na území výše uvedených států jsou zveřejněny v rejstřících národních norem vydávaných v těchto státech, jakož i na internetu na webových stránkách příslušné národní normalizace těla.
V případě revize, změny nebo zrušení této normy budou příslušné informace zveřejněny na oficiálních stránkách Mezistátní rady pro normalizaci, metrologii a certifikaci v katalogu „Mezistátní normy“
UPRAVENÁ Změna č. 1, schválená a uvedená v platnost nařízením Spolkové agentury pro technickou regulaci a metrologii ze dne 01.09.2021 N 908-st od 01.01.2022
Tato norma zavádí přímou kompetitivní enzymovou imunoanalýzu na pevné fázi (dále jen ELISA) pro stanovení obsahu mykotoxinů: množství aflatoxinů
, deoxynivalenol (dále jen DON), zearalenon, ochratoxin A, T-2 toxin, suma fumonisinů (pro fumonisin
Tato metoda se nevztahuje na produkty minerálního původu a organické syntézy.
Rozsahy měření jsou uvedeny v tabulce 4.
2 Normativní reference
Tato norma používá normativní odkazy na následující mezistátní normy.
GOST 12.1.004 Systém norem bezpečnosti práce. Požární bezpečnost. Obecné požadavky
GOST 12.1.005 Systém norem bezpečnosti práce. Všeobecné hygienické a hygienické požadavky na vzduch v pracovním prostoru
GOST 12.1.007 Systém norem bezpečnosti práce. Škodlivé látky. Klasifikace a obecné požadavky na bezpečnost
GOST 12.1.019 Systém norem bezpečnosti práce. Elektrická bezpečnost. Obecné požadavky a názvosloví typů ochrany
GOST 12.2.007.0 Systém norem bezpečnosti práce. Elektrické výrobky. Všeobecné bezpečnostní požadavky
GOST 12.4.009 Systém norem bezpečnosti práce. Požární zařízení pro ochranu objektů. Hlavní typy. Ubytování a servis
GOST 12.4.021 Systém norem bezpečnosti práce. Větrací systémy. Obecné požadavky
GOST 1770 (ISO 1042-83, ISO 4788-80) Laboratorní sklo. Válce, kádinky, baňky, zkumavky. Všeobecné technické podmínky
GOST 6709* Destilovaná voda. Specifikace
* V Ruské federaci platí GOST R 58144-2018.
Reagencie podle GOST 6995. Metanol je jed. Specifikace
GOST 12026 Laboratorní filtrační papír. Specifikace
GOST 13496.0 Krmné směsi, krmné suroviny. Metody odběru vzorků
GOST 13586.3 Obilí. Přejímací pravidla a metody vzorkování
GOST 13979.0 Dort, moučka a hořčičný prášek. Přejímací pravidla a metody vzorkování
GOST 16317 Elektrické chladicí spotřebiče pro domácnost. Všeobecné technické podmínky
GOST 25336 Laboratorní sklo a vybavení. Typy, hodnostní parametry a velikosti
GOST 21669* Krmná směs. Termíny a definice
* V Ruské federaci platí GOST R 51848-2001 „Krmné směsi“. Termíny a definice”.
GOST 28311 Lékařské laboratorní dávkovače. Obecné technické požadavky a zkušební metody
GOST 29169 (ISO 648-77) Laboratorní sklo. Pipety s jednou značkou
GOST 29227 (ISO 835-1-81) Laboratorní sklo. Odměrné pipety. Část 1. Obecné požadavky
GOST OIML R 76-1 Státní systém pro zajištění jednotnosti měření. Neautomatické váhy. Část 1. Metrologické a technické požadavky. Testy
GOST ISO 6498 Krmiva, krmné směsi. Příprava vzorků pro testování
GOST ISO 5725-1-2003** Přesnost (správnost a přesnost) metod a výsledků měření. Část 1. Základní ustanovení a definice.
** V Ruské federaci platí GOST R ISO 5725-1-2002 „Přesnost (správnost a přesnost) metod a výsledků měření. Část 1. Základní ustanovení a definice.“
GOST ISO 5725-6-2003*** Přesnost (správnost a přesnost) metod a výsledků měření. Část 6: Použití hodnot přesnosti v praxi
*** V Ruské federaci platí GOST R ISO 5725-6-2002 „Přesnost (správnost a přesnost) metod a výsledků měření. Část 6. Použití hodnot přesnosti v praxi.“
Poznámka – Při používání této normy je vhodné ověřit si platnost referenčních norem a klasifikátorů na oficiálních stránkách Mezistátní rady pro normalizaci, metrologii a certifikaci (www.easc.by) nebo podle rejstříků národních norem zveřejněných v státy uvedené v předmluvě nebo na oficiálních webových stránkách příslušných národních normalizačních orgánů. Je-li na dokument uveden nedatovaný odkaz, měl by se použít mutatis mutandis aktuální dokument. Pokud je odkazovaný dokument nahrazen odkazem s datem, měla by se použít uvedená verze tohoto dokumentu. Pokud je po přijetí této mezinárodní normy provedena změna v odkazovaném dokumentu, na který je uveden datovaný odkaz, která ovlivní ustanovení, na které je odkazováno, toto ustanovení se použije bez ohledu na tuto změnu. Pokud je odkazovaný dokument zrušen bez náhrady, platí ustanovení, ve kterém je uveden odkaz na něj, v rozsahu, v němž není tento odkaz dotčen.
(Změněné vydání, Rev. N 1).
3 Termíny a definice
3.1 Tato norma používá termíny a definice v souladu s GOST 21669, GOST ISO 6498, jakož i následující termíny s odpovídajícími definicemi:
3.1.1 testovací systém: Sada (soubor) speciálně vybraných činidel a složek určených pro stanovení jedné nebo více specifických látek.
3.1.2 hlavní roztok: Roztok činidla připravený předem a nezbytný pro přípravu dalších roztoků.
4 Podstata metody
Podstatou metody je extrahovat mykotoxiny ze vzorků extrakčním činidlem, provést reakci v buňkách destičky, v jejímž důsledku se vytvoří barevné komplexy, přidat zastavovací činidlo, změřit hodnoty optické hustoty a vypočítat výsledky.
Pro stanovení mykotoxinů se používá jeden ze dvou testovacích systémů.
Metoda využívající testovací systém č. 1 se dvěma destičkami zahrnuje smíchání konjugátu a extraktů vzorků nebo kalibračních roztoků na první destičce a provedení reakce na druhé destičce se specifickými protilátkami aplikovanými (imobilizovanými) na povrch buněk destičky (dále jen označované jako AT), po inkubaci a promytí Nosič z nenavázaných složek zavádí substrát jako výsledek reakce, se kterou se tvoří barevné komplexy.
Metoda využívající testovací systém N 2 s jednou destičkou zahrnuje dávkování extraktů vzorků nebo kalibračních roztoků, konjugátu a specifických protilátek do jamek destičky s imobilizovanými nespecifickými protilátkami. Po inkubaci a promytí nosiče z nenavázaných složek se jako výsledek reakce přidá substrát, se kterým se tvoří barevné komplexy.
(Změněné vydání, Rev. N 1).
5 Bezpečnostní požadavky
5.1 Při provádění zkoušek je nutné dodržovat bezpečnostní požadavky při práci s chemickými činidly v souladu s GOST 12.1.007, požadavky na elektrickou bezpečnost při práci s elektrickými spotřebiči v souladu s GOST 12.1.019 a GOST 12.2.007.0. požadavky stanovené v technické dokumentaci pro používaná zařízení.
5.2 Práce s chemickými činidly by měla být prováděna v digestoři.
5.3 Místnost musí být vybavena ventilačními systémy v souladu s GOST 12.4.021, splňovat požadavky na požární bezpečnost v souladu s GOST 12.1.004 a mít hasicí zařízení v souladu s GOST 12.4.009.
5.4 Obsah škodlivých látek ve vzduchu by neměl překročit přípustné hodnoty podle GOST 12.1.005.
5.5 Při práci s metanolem je nutné používat osobní ochranné prostředky (rukavice a brýle), aby se droga nedostala na kůži a sliznice, a také dodržovat pravidla osobní hygieny. Pokud se metanol dostane na kůži nebo sliznice, okamžitě je opláchněte velkým množstvím vody.
Práce s metanolem se provádí v digestoři s průběžným přívodem a odvětráváním. Veškeré práce s metanolem by měly být prováděny mimo dosah ohně.
5.6 Zastavovací roztok zkušebního systému obsahuje kyselinu sírovou, při práci s ní je nutné používat osobní ochranné prostředky (rukavice a brýle) (viz 12.2). Pokud se zastavovací roztok dostane do kontaktu s kůží nebo sliznicemi, okamžitě je opláchněte velkým množstvím vody.
6 Zkušební podmínky
Při přípravě a provádění zkoušek musí být splněny následující podmínky:
Studium účinnosti použití biotestovací metody ke stanovení úrovně obecné toxicity mykotoxinů
1 Městský rozpočtový vzdělávací ústav „Střední škola č. 1 města Stroitel, městský obvod Jakovlevskij“ MBOU „Střední škola č. 1g. Stavitel”
1 Městská rozpočtová vzdělávací instituce “Střední škola č. 1 města Stroitel, městská část Jakovlevskij”
Autor práce byl oceněn diplomem vítěze III. stupně
Text práce je umístěn bez obrázků a vzorců.
Plná verze práce je k dispozici v záložce „Job Files“ ve formátu PDF
Podle některých odhadů činí roční celosvětová ztráta zemědělských produktů v důsledku houbové infekce a kontaminace mykotoxiny více než 15 miliard USD a více než miliardě tun produktů je ročně ohroženo kontaminací [3]. V Rusku může infekce semen obilnin houbami vést ke ztrátě až 25 % výnosu a snížení klíčivosti semen o 35 % [19].
Mykotoxiny jsou všudypřítomné, mohou ovlivnit potravinářské produkty v jakékoli fázi výroby, přepravy a skladování, což činí problém kontaminace mykotoxiny mimořádně aktuální.
Relevance výzkumu je způsobena potřebou vyvinout jednoduché metody identifikace mykotoxinů, protože většina z nich má cytotoxické, imunosupresivní, mutagenní vlastnosti a jsou závažným rizikovým faktorem pro zdraví hospodářských zvířat a lidí [13].
Výzkumná hypotéza – použití biotestovacích metod je mnohem jednodušší než použití hloubkových komplexních metod, jsou vhodné pro širokou aplikaci.
účel práce – stanovení úrovně toxicity trichocetenových mykotoxinů, zejména toxinu T-2, pomocí biotestovacích metod.
K dosažení cíle práce byly stanoveny následující: úkoly:
1. prostudovat literaturu o metodě biotestování jako způsobu stanovení toxicity prostředí, seznámit se s různými druhy mykotoxinů a jejich účinkem na živé organismy;
2. Určete úroveň toxicity T-2 toxinu na dýňových semenech během růstu postranních kořenů u sazenic okurek.
Předmět zkoumání začal studovat vliv roztoků toxinů T-2 různých koncentrací na růstové procesy semen okurek.
Předmět studia Jednalo se o semena okurek odrůdy Phoenix z produkce Agrofirm POISK LLC. Šarže semen byla vyrobena v souladu s GOST R 52171-03, což nám umožňuje s velkou důvěrou mluvit o vhodnosti semen pro setí.
Metody výzkumu zahrnovala přípravu roztoků o určité koncentraci a nastavení laboratorního experimentu.
ANALYTICKÝ PŘEHLED LITERATURY
1.1. Biotestování je metoda pro stanovení toxicity prostředí
Biotestování je metoda stanovení toxicity prostředí pomocí testovacích objektů, které signalizují nebezpečí, bez ohledu na to, které látky a v jaké kombinaci způsobují změny životních funkcí testovaných objektů [8].
K hodnocení parametrů prostředí se využívají standardizované reakce živých organismů (jednotlivých orgánů, tkání, buněk nebo molekul). V organismu, který zůstává po kontrolní období ve znečištěných podmínkách, dochází ke změnám ve fyziologickém, biochemickém, genetickém, morfologickém nebo imunitním systému [9]. Objekt je odstraněn ze svého stanoviště a v laboratorních podmínkách je provedena nezbytná analýza.
Biotestování je zkrátka speciální případ bioindikace, kdy se u volně žijících organismů za standardizovaných podmínek studují poškození nebo odchylky od normy způsobené expozicí nepříznivým faktorům (toxickým látkám) [16].
Biotestování, které poskytuje málo informací o povaze toxické látky, umožňuje s velkou jistotou určit stupeň obecné toxicity zkoumaného objektu [1, 0, 15]. Biotestovací metody jsou vysoce citlivé a umožňují stanovení toxických látek v koncentracích až 17 -10%. Předmětem zkoumání může být jakýkoli objekt vnějšího prostředí (voda, půda), průmyslové odpady atp. [8].
Jako testovací objekty se používají zástupci hlavních trofických vazeb vodního ekosystému: bakterie, řasy, prvoci, korýši, ryby [16].
Bioindikace zahrnuje identifikaci existujícího nebo akumulujícího se znečištění pomocí indikátorových druhů živých organismů a ekologických charakteristik společenstev organismů [15].
Pro řešení komplexu moderních problémů musí biotestovací metody používané k hodnocení životního prostředí splňovat následující požadavky:
být použitelný pro hodnocení jakýchkoli změn životního prostředí v přirozeném prostředí živých organismů; charakterizovat nejobecnější a nejdůležitější parametry životní aktivity bioty;
být dostatečně citlivý, aby detekoval i počáteční reverzibilní změny prostředí;
být vhodné pro jakýkoli typ živých bytostí a jakýkoli typ dopadu; být vhodný nejen pro laboratorní modelování, ale i pro výzkum v přírodě;
být dostatečně jednoduchý a ne příliš drahý pro široké použití [8, 12].
Tempo a rytmus růstových procesů jsou slibné pro hodnocení negativních účinků stresu. Metody biotestování těchto procesů jsou jednoduché, relativně levné, vhodné pro širokou aplikaci a umožňují posoudit kvalitu přírodního prostředí se vší rozmanitostí změn prostředí.
1.2. Mykotoxiny – přírodní kontaminanty produktů
Mykotoxiny (název je odvozen od řeckého kořene houba – „mykes“ a jed – „toxikon“) – jedná se o odpadní produkty mikroskopických plísňových hub rodů Fusarium, Aspergillus, Myrothecium, Stachybotrys, Trichoderma, Trichothecium, Penicillium aj. Více je známo více než 250 druhů hub, které produkují několik stovek mykotoxinů [18]. Společným znakem všech mykotoxinů je toxicita, převážně ve vztahu k eukaryotním organismům [1, 5]. Toxický účinek mykotoxinů je způsoben jejich interakcí s úseky DNA, RNA a molekul proteinů, což vede k narušení a potlačení procesů biosyntézy proteinů. Mykotoxiny mají výrazné mutagenní (včetně hepatokarcinogenních) vlastnosti [4].
Mykotoxiny se liší svou chemickou strukturou, toxicitou a mechanismem účinku. Mezi nejnebezpečnější typy mykotoxinů podle klasifikace jejich účinků na organismus patří:
Karcinogenní (vznik a rozvoj rakoviny)
Mutagenní (kvantitativní a kvalitativní změny v dědičném aparátu buňky)
Teratogenní (funkční, biochemické a strukturální změny v těle matky a plodu, způsobené vlivem zvenčí zavedených, v tomto případě biochemických faktorů) [20].
Většina mykotoxinů jsou tepelně odolné krystalické látky, které jsou vysoce rozpustné v organických rozpouštědlech. Mykotoxiny (s výjimkou ochratoxinů) jsou dosti odolné vůči kyselinám a jsou ničeny zásadami za vzniku netoxických nebo málo toxických sloučenin [22].
Mezi nejškodlivější účinky na zdraví lidí a zvířat patří:
Trichocetenové mykotoxiny (trichoceteny)
Zearalenon a jeho deriváty [18].
Trichothecenové mykotoxiny jsou mykotoxiny syntetizované houbami rodů Fusarium, Cephalosporium, Myrothecium, Stachybotrys, Trichoderma a Trichothecium; obsahují 12,13 – epoxyseskviterpenoidní zbytek (trichotekan); Je známo asi 100 trichothecenových mykotoxinů, které patří do 4 typů:
* A (toxin T-2, toxin NT-2, diacetoxyscirpenol),
* B (deoxynivalenol, nivalenol, fusarenon X, trichothecin),
* C (krotokol, krotocin),
* D (verrukariny, roridiny) [2].
Trichoteceny vykazují teratogenní, cytotoxické, imunosupresivní, dermatotoxické vlastnosti, působí na krvetvorné orgány, centrální nervový systém, způsobují leukopenii, hemoragický syndrom a jsou zodpovědné za řadu potravinových mykotoxikóz u lidí i zvířat. Toxické vlastnosti jsou dány jejich účastí na supresi biosyntézy proteinů [2]. Ze všech trichothecenů jsou pouze 4 přirozené kontaminanty potravin (jsou uvedeny jako zástupci skupin A a B). LD pro tyto mykotoxiny je asi 46 mg/kg [22].
2. VÝZKUMNÉ METODY
Potravinové suroviny jsou poměrně často kontaminovány T-2 toxinem [5]. Výrazné toxické vlastnosti toxinu T-2 si vyžádaly kontrolu potravinových surovin a potravinářských výrobků, aby byla zajištěna jejich bezpečnost pro spotřebitele [2].
V moderní vědecké literatuře existují informace, že nejúspěšnějším testem pro hledání sloučenin s cytostatickým účinkem je pozorování potlačení tvorby postranních kořenů u sazenic okurek (Ivanov V.B., 2011) [11]. Produktivita a ekologická plasticita rostlin do značné míry závisí na fyziologické aktivitě kořenových systémů. Kořenový systém okurky je vykořeněný, ale relativně slabě vyjádřen, protože většina kořenů se nachází v horní (15-20 cm) vrstvě půdy, i když jednotlivé kořeny pronikají do hloubky 1 m nebo více [21] .
Když dýňová semínka vyklíčí, objeví se postranní kořínky již třetí den. Bylo prokázáno, že cytostatika zcela zastaví výskyt postranních kořenů. Existuje řada toxických látek, které inhibují pouze růst hlavního kořene, ale neovlivňují růst postranních kořenů. Například vysoké koncentrace solí těžkých kovů olova a kadmia výrazně inhibují růst hlavního kořene, ale neovlivňují tvorbu postranních.
Modelová zkušenost je založena na biotestovací metodě klíčení semen, zahrnuté v hygienických pravidlech a předpisech SanPiN 2.1.7.573-96 (schváleno usnesením Státního výboru pro sanitární a epidemiologický dozor Ruské federace ze dne 31. října 1996 N 46 ) [22]. Experiment byl proveden dvakrát. Poprvé byl reprodukován ve variantách v koncentracích 0.05 ppm, 0.1 ppm, 0.2 ppm, 0.3 ppm, 1 ppm, 3 ppm, 5 ppm a 10 ppm, plus kontrola s destilovanou vodou ve dvou replikách po 9 semenech (162 kusů ). Podruhé byly připraveny pracovní roztoky toxinu T-2 v koncentracích 0.1 ppm, 0.2 ppm, 0.3 ppm, 1 ppm, 2.5 ppm, 5 ppm, 10 ppm, 25 ppm, 50 ppm, 100 ppm, rovněž ve dvou opakováních , ale po 10 semenech (220 ks). Zvýšení koncentrací ve druhém experimentu je spojeno s účelem otestovat účinek zvýšených koncentrací toxinu a objevit vzorce vývoje semen okurek pod jeho vlivem.
Jako testovací objekt byla použita semena okurky. Do každé Petriho misky se vloží 9 semen (pokus č. 1) nebo 10 semen (pokus č. 2), zalije se 5 ml destilované vody, pokud se jedná o kontrolu, nebo 5 ml pracovního roztoku toxinu T-2 . Hladina tekutiny v šálcích by měla být pod povrchem semen. Nádobí se přikryje a umístí při teplotě 22 0 C.
Experiment končí po 72 hodinách měřením délky hlavního kořene a postranních kořenů.
3. VÝSLEDKY VÝZKUMU
3.1. Použití růstových charakteristik kořenů semen okurky
jako testovací objekt
Na začátku pokusu určete laboratorní klíčivost semen. Klíčením se rozumí schopnost semen vytvořit normální semenáčky v určitém časovém období pro každou plodinu za optimálních podmínek klíčení. Vyjadřuje se jako procento normálních sazenic z počtu analyzovaných.
